(1)引物设计不够优化。应避免引物二聚体和发夹结构的出现。

(2) 引物浓度不佳。适当降低引物的浓度, 并注意上下游引物的浓度配比。

(3) 镁离子浓度过高。适当降 低镁离子浓度,或选择更合适的mix 试剂盒。

(4)模板有基因组的污染。RNA 提取过程中避免DNA的引入, 或通过引物设计避免非特异扩增。